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mitoPROT

Entwicklung einfacher und hoch sensitiver Verfahren zur Quantifizierung der fünf Atmungskettenkomplexe in Patientenproben, sowie Screening der Patienten des Konsortiums mittels des neuen Protokolls.

Projektstandort: Universität Frankfurt

Stand der Forschung

Die Identifizierung von Veränderungen in der mitochondrialen Atmungskette auf Proteinebene erfolgt häufig über die direkte Bestimmung der Enzymaktivitäten oder die elektrophoretische Trennung der mitochondrialen Membranproteinkomplexe in nativen Gelen, gefolgt von in-Gel Enzymaktivitätsfärbungen, Western-Blotting oder densitometrischer Quantifizierung. Für diese Analysen sind oft größere Mengen an Probenmaterial nötig und sie sind sehr zeitaufwendig. Ähnlich wie bei der klassischen "Fluorescence Difference Gel Electrophoresis" (DIGE) ist der Einsatz von Fluoreszenzfarbstoffen auch für native Gele erfolgversprechend. Die Verwendung von reaktiven hochsensitiven Fluoreszenzfarbstoffen ist daher sehr attraktiv um mitochondriale Proteinkomplexe auch in Zellen und Geweben mit geringem Gehalt an Mitochondrien zu quantifizieren. Diese Methode könnte dann für die Diagnostik von mitochondrialen Erkrankungen eingesetzt werden.

Ziele

Das Hauptziel des Projektes ist die Entwicklung eines hochsensitiven Tests für die Quantifizierung der mitochondrialen Proteinkomplexe in Patientenfibroblasten und das Screening der Kohorte von Patientenproben des Konsortiums. Diese Ergebnisse können den Collaborationspartnern anderer Teilprojekte in diesem Netzwerk gezielte Hinweise auf die zugrunde liegenden genetischen Veränderungen in der mitochondrialen und nukleären DNA geben. Wir erwarten, dass auch andere pädiatrische und neurologische Kliniken und biochemische Forschungseinrichtungen außerhalb des Konsortiums von dieser einfachen und hochsensitiven Technik profitieren werden.

Projektmanagement und Kontaktadresse

Dr. rer. nat. Ilka, Wittig

Ilka Wittig, Dr. rer. nat.

Goethe-Universität Frankfurt

Zentrum der biologischen Chemie, Molekulare Bioenergetik

Theodor-Stern-Kai 7, Haus 26, 60590 Frankfurt am Main

Tel: +49 69 - 6301 - 4180

Fax: +49 69 - 6301 - 6970

Web: www.zbc.kgu.de/bioenergetik/schaegger.ht ...

Projektteilnehmer

Prof. Dr. rer. nat. Hermann, Schägger

Hermann Schägger, Prof. Dr. rer. nat.

Goethe-Universität Frankfurt

Zentrum der biologischen Chemie, Molekulare Bioenergetik

Theodor-Stern-Kai 7, Haus 26, 60590 Frankfurt am Main

Tel: +49 69 - 6301 - 4180

Fax: +49 69 - 6301 - 6970

Web: www.zbc.kgu.de/bioenergetik/schaegger.ht ...

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